体外转录的步骤有哪些
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转录通常发生在生物体内,如果我们将含有RNA转录酶、NTP等条件,在体外无细胞系统中,用DNA作为模板,模仿体内转录过程生成RNA,这样的技术则能够控制转录的基因、转录的过程和转录后RNA的用途,该技术被称为体外转录。
体外转录的步骤如下:
1、 提取cDNA质粒;
2、 线性化质粒;
3、 纯化质粒: 加等体积的Tris苯酚氯仿到100微米限制内切酶消化体系,涡旋振荡20秒, 13000克离心5分钟。上清转移,加入2倍体积无水乙醇和1比10体积的的
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